Пробоподготовка
Интернет-магазин СТАЙЛАБ предлагает купить оборудование для подготовки проб к ПЦР. У нас вы найдете вортексы и шейкеры, гомогенизирующие биологический материал, блочные нагреватели для ПЦР-пробирок и микропланшетов, а также центрифуги, позволяющие проводить очистку и выделение ДНК.
В зависимости от поставленных задач пробоподготовка для ПЦР может выполняться различными способами, однако их суть всегда состоит в экстракции ДНК из образца и ее последующей очистке, то есть удалении или нейтрализации примесей. На первом этапе выделения ДНК проводится растворение (лизис) клеток, что позволяет высвободить их содержимое. Для этого используются механические способы размола и гомогенизации, а также обработка различными детергентами, иногда с добавлением протеолитических ферментов. В некоторых случаях бывает достаточно прокипятить образец в течение нескольких минут, а экспресс-методы экстракции обычно предполагают сочетание нагрева с лизирующим буфером.
Следующая стадия процедуры подразумевает очистку от хромосомных белков и других примесей, которая традиционно выполняется при помощи фенол-хлороформной экстракции. Дальнейшее осаждение и концентрирование ДНК, как правило, проводится с помощью этилового и изопропилового спирта в присутствии соли, образующей с кислотой ионные связи. Несмотря на довольно высокую сложность, этот способ пользуется популярностью и подходит для широкого спектра биологических образцов. Еще большей универсальностью отличаются твердофазные, или сорбционные методы экстракции.
В основе сорбционной экстракции лежит способность ДНК обратимо связываться с поверхностью твердой фазы (стеклянных бус или волокон, кремниевых носителей и др.) в присутствии хаотропной соли, например, гуанидина хлорида или изотиоцианата. Хаотропная активность этих соединений нарушает водородные связи в водном растворе органических веществ, что приводит к ослаблению гидрофобных взаимодействий и деструкции клеточных мембран. Таким образом, эти соли обеспечивают не только связывание нуклеиновых кислот с субстратом, но и предшествующий ему лизис клеток. В отсутствие хаотропных агентов ДНК легко смывается с носителя под действием элюирующего буфера.
В процессе выделения и очистки ДНК ключевое место занимает процедура центрифугирования. Центрифуга используется на самых разных этапах процесса — в частности, для следующих операций:
- отделение клеток от питательных сред, растворов или физиологических жидкостей;
- осаждение нуклеиновых кислот;
- сепарация денатурированных белков;
- удаление реактивов и т.д.
В интернет-магазине СТАЙЛАБ вы найдете компактные мини-центрифуги, простые в управлении и занимающие минимум места на рабочем столе. Кроме того, в ассортименте нашего интернет-магазина имеются приборы, обеспечивающие равномерное перемешивание образцов: вортексы и лабораторные шейкеры, в том числе снабженные функцией нагрева. Также вы сможете купить разнообразные модели блочных нагревателей для инкубирования в ходе экстракции ДНК, которые при необходимости можно использовать и для проведения амплификации. Рекомендуем дополнить нагреватель сменным блоком, предназначенным для микроцентрифужных пробирок и стандартных 96-луночных планшетов.
