Серийное разведение

Стерильные буферные растворы и аксессуары для 10-кратного серийного разведения доступны для заказа в интернет-магазине СТАЙЛАБ.

Общее микробное число (ОМЧ) служит важнейшим показателем микробной обсемененности, который позволяет не только оценивать санитарное состояние различных учреждений и контролировать безопасность и свежесть пищи, но и судить о степени загрязненности окружающей среды. При подсчете общего микробного числа предполагается, что его значение напрямую отражает вероятность присутствия патогенных микроорганизмов. Однако в действительности эта величина учитывает количество и других микробов, в том числе сапрофитов, которые негативно влияют на выживаемость патогенной микрофлоры. Таким образом, показатель ОМЧ скорее подходит для оценки величины загрязнения внешней среды органическими веществами и поэтому имеет особое значение для анализа качества питьевой воды, а также воздуха и почвы. На практике используются два метода измерения ОМЧ:

1. Метод прямого подсчета, или оптический. Этот метод не дает возможности различить живые и мертвые бактериальные клетки, но отличается быстротой выполнения, поэтому в основном применяется для экстренного анализа (к примеру, на очистных сооружениях).
2. Бактериологический, или метод количественного посева материала на питательные среды.

Основной количественной техникой измерения ОМЧ, позволяющей учитывать только жизнеспособные клетки, считается метод серийных разведений. Суть метода состоит в приготовлении нескольких последовательных десятикратных разведений исследуемого образца. Полученные разведения пересеваются на питательную среду, при этом чаще всего используются методы заливки или газонного посева. По окончании инкубации подсчитывается количество выросших колоний, дающее представление о содержании бактерий в исходном образце. Если посев делался из разведения, полученное число следует умножить на величину разведения.

Для подсчета предпочтительно использовать разведения, дающие от 50 до 150 колоний. При очень большом их количестве страдает точность исследования, в то время как малая численность колоний может привести к существенным ошибкам при повторном подсчете (вследствие загрязнения посторонней микрофлорой). Стоит учитывать, что число колоний, выросших на питательной среде, не всегда точно соответствует числу бактерий в исходном образце за счет неравномерного распределения или слипания клеток и по другим причинам. Поэтому величину общей микробной обсемененности принято выражать в КОЕ (колониеобразующих единицах, то есть клетках, в процессе размножения формирующих колонию) на 1 мл жидкого, 1 г твердого или 1 м³ газообразного исследуемого субстрата.

Как правило, для приготовления десятикратного разведения 1 мл инокулята вносят в 9 мл стерильной воды или стерильного физиологического раствора, после чего 1 мл уже разведенного инокулята переносят в следующую пробирку с жидкостью. Существуют также растворы для серийного разведения, не требующие использования дополнительной лабораторной посуды и предполагающие добавление инокулята непосредственно в ячейку с раствором. Интернет-магазин СТАЙЛАБ предлагает купить готовые к использованию стерильные растворы в индивидуальных емкостях объемом 9 мл. Для вскрытия закупоренной ячейки предназначается специальный пробойник, который также можно приобрести в интернет-магазине СТАЙЛАБ.