Иммуноаффинная очистка

Интернет-магазин СТАЙЛАБ предлагает приобрести оборудование для иммуноаффинной и твердофазной экстракции, позволяющее выполнять пробоподготовку для экологического мониторинга, пищевого и фармацевтического анализа и множества других исследований.

На специфическом взаимодействии антигена с соответствующим антителом строятся не только разнообразные методы анализа (например, ИФА) но и некоторые техники очищения и разделения веществ. К таким методам относится иммуномагнитная сепарация, а также иммунноаффинная очистка, или иммуноаффинная хроматография.

Иммуноаффинная очистка (иммуноаффинная экстракция) представляет собой разновидность лигандной хроматографии, основанной на реакции разделяемых веществ с неподвижными лигандами. В данном случае роль лигандов исполняют антитела, ковалентно связанные с подходящим твердым носителем. Антитела в качестве лигандов отличаются двумя очень существенными достоинствами:

• высокой специфичностью, которая позволяет извлекать из сложной смеси компоненты, содержащиеся даже в очень малых количествах;
• большим сродством к соответствующим антигенам, что обеспечивает прочность образующейся между ними связи.

Специфичность антител связана с их способностью распознавать определенные эпитопы (антигенные детерминанты), то есть участки связывания в молекуле антигена. Физическая величина, характеризующая прочность этого связывания, носит название афинности. Чаще всего встречаются поливалентные антигены и антитела, способные образовывать комплексы с несколькими молекулами одновременно. В таком случае сродство антитела к антигену описывается авидностью, или функциональной аффиностью, которая определяется суммарной силой взаимодействия всех антигенных детерминант с антителами. Количественной мерой аффинности служит константа диссоциации получившегося комплекса биологических молекул — чем она ниже, тем прочнее образовавшаяся связь.

Для проведения иммуноаффинной очистки используются стандартные хроматографические колонки или картриджи для твердофазной экстракции. Колонка заполняется иммуносорбентом, то есть инертной твердой подложкой, на которой закреплены выделенные и очищенные антитела. Проходя сквозь колонку, выделяемые антигены образуют связи со специфическими антителами и задерживаются внутри иммуносорбента. По окончании процесса экстракции и удаления остальных компонентов пробы исследуемое вещество элюируется путем промывания растворителями и подвергается анализу с помощью различных методов: ИФА, ВЭЖХ, газовой хроматографии, хромато-масс-спектрометрии и др.

Константа диссоциации комплексов «антиген-антитело» в среднем составляет около 10-9–10-12 M, что на несколько порядков меньше, чем константы диссоциации при прочих аффинных взаимодействиях биологических молекул. В сочетании с высокой избирательностью антител это позволяет объединять стадии экстракции, концентрирования исследуемого вещества и очистки образца от компонентов сложных матриц и прочих загрязнителей. Промытый иммуносорбент можно использовать многократно, что служит еще одним важным преимуществом данного метода очистки.

Необходимый набор оборудования для иммуноаффинной экстракции состоит из колонки или картриджа и шприца, с помощью которого образец подается в колонку. Полезными дополнениями служат различные адаптеры для шприца, позволяющие также соединять несколько колонок или подключать к процессу источник сжатого воздуха или инертного газа. Купить эти и другие приспособления для иммуноаффинной очистки вы сможете в интернет-магазине СТАЙЛАБ.